界说：
酶联免疫吸附测定（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反映的定性和定量检测步骤。
常用的ELISA能够分为五大类：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争ELISA、竞争抑造ELISA。其他的ELISA都由这五类组合衍生。
所有的ELISA根基由基础的几个步骤组合而成：将抗原或抗体吸附到固相载体上；参与待检样品以及后续试剂；温育；洗涤去掉游离未结合的反映物；参与酶检测底物；了局的判读
分类：
1.直接ELISA
将抗原按肯定的比例稀释，包被到固相载体上，参与稀释好的特异性的酶标抗体，孵育后参与底物显色并判读了局。直接ELISA中只经过了一步信号放大，所以其活络度不是很高
2.间接ELISA
间接ELISA与直接ELISA分歧的是，与包被好的抗原结合的长短酶标抗体，另表再引入第二种抗体（即二抗）。二抗是经过酶标的，它能够与第一种抗体特异性结合，最后参与底物显色并判读了局。在检测抗体的效价、血清的效价以及单克隆抗体的筛选过程中，间接ELISA都是极度沉要的尝试过程。
3.夹心ELISA
3.1直接夹心ELISA
3.1.1双抗体夹心ELISA
将第一种抗体（捕获抗体）包被在固相载体上，封关后参与待检抗原，温育后参与第二种抗体（检测抗体），捕获抗体和检测抗体可所以针对分歧表位的两种单抗，也可所以针对统一抗原的一种单抗与一种多抗，但是检测抗体必要经过酶标。
3.1.2双抗原夹心ELISA
道理和操作与双抗体夹心ELISA根基一样，分歧的是包被的是抗原，待检对象是抗体，而后参与酶标抗原，再加底物显色。双抗原夹心ELISA利用特异性的抗原包办酶标二抗，所以特异性比间接法更好。另表，由于间接ELISA中使用的二抗通常只能鉴别IgG，而双抗原夹心ELISA中任何类似的免疫球蛋白都能够被检测出，因而，双抗原夹心ELISA比间接ELISA也更活络。
3.2间接夹心ELISA
间接夹心ELISA是基于两种分歧种属起源的抗体的夹心ELISA，其道理是将一各种属起源的特异性抗体包被于固相载体上（作为捕获抗体），封关，参与待检抗原，温育，洗涤后参与另一各种属起源的特异性抗体（非酶标，作为检测抗体），最后参与酶标二抗（特异性鉴别检测抗体），再加底物显色。与直接双抗夹心ELISA相比，其中引入了特异性鉴别检测抗体的酶标二抗，相当于整个别系的信号增长了一步放大系统，最终的了局比直接双抗夹心ELISA更活络。
4.竞争ELISA
将特异性抗体吸附于固相载体表表，经洗涤后分成两组：一组加酶象征抗原和被测抗原的混合液；而另一组只加酶象征抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的未知抗原的量。这种步骤所测定的抗原只有有一个结合部位即可，因而，对幼分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。
5.竞争抑造ELISA
预先将抗原包被在固相载体上，尝试时参与稀释好的待检抗原（或抗体），而后顺次参与特异性的抗体以及此抗体对应的酶标二抗。待检标本中的抗原（或抗体）就和预造备系统中固相载体上结合的抗原（或抗体）竞争结合特异性的抗体（或固相载体上结合的抗原）。洗掉被竞争的特异性抗体，最后加底物显色。最终显色的了局与待检抗原（或抗体）量呈反比。
尝试资料：
96孔高吸附酶标板[NEST]
10μL/200μL/1000μL吸头[NEST]
单通路移液枪、多通路移液枪
微量离心管[NEST]
显色液（A/B液）
15/50ml离心管[NEST]
洗液（PBST）
终止液（H2SO4）
BSA蛋白
稀释液（PBS）
包被液（CB）
全波段酶标仪
恒温箱
尝试流程：
以使用比力宽泛的间接ELISA为例，简述尝试过程
1.抗原包被：
将对应抗原用CB稀释至1ug/ml，参与96孔酶标板孔中，每孔100ul，4℃包被过夜，之后进行下一步骤。若尝试功夫比力严重，包被后可搁置恒温箱内，37℃包被3h后即可进行下一步操作。
2.洗板：
将酶标板内的包被液甩干，用洗液（PBST——0.2%的吐温20 PBS）洗濯酶标板2次，并拍干板内液体，使之无余液残留。
3.封关：
用PBS充分溶化BSA蛋白造备成封关液（体积比为5~10%），将封关液参与酶标板孔中，每孔150ul，恒温箱37℃封关1h。若尝试功夫铺排丰裕，可在4℃前提下封关过夜。
【若抗原内含有偶联BSA分子，则更换封关成分，可用羊血清包办】
4.洗板：
将酶标板内的封关液液甩干，用洗液（PBST）洗濯酶标板2次，并拍干板内液体，使之无余液残留。
【若暂无使用需要，可将包被后的酶标板搁置-20℃前提下贮存，必要时解冻使用即可。】
5.一抗：
用PBS稀释液将待检样品（含有对应抗原的抗体）按需要稀释，再将稀释后样本参与包被好的酶标板中，每孔100ul，阴性对照孔参与100ulPBS稀释液，在恒温箱中37℃孵育1h。
6.洗板：
将酶标板内的一抗甩干，用洗液（PBST）洗濯酶标板3次，并拍干板内液体，使之无余液残留。
7.二抗：
用PBS稀释液依照注明，稀释对应的酶标二抗，将稀释实现的二抗参与一抗孵育实现的酶标板中，每孔100ul，恒温箱37℃孵育30min。
8.洗板：
将酶标板内的二抗甩干，用洗液（PBST）洗濯酶标板4次，并拍干板内液体，使之无余液残留。
9.显色：
将显色液A/B液等体积混合，配置成显色液，参与二抗孵育实现的酶标板中，每孔100ul，恒温箱避光37℃反映5~10min。
【显色液现配现用，不成提前配置】
10.终止与读数：
显色实现后，毋庸抛弃显色液，直接参与终止液（H2SO4）终止反映，每孔50ul，随即转移至全波段酶标仪450nm单波长度数，或450nm/620nm双波长读数，想书实现后处置数据。
使用到的NEST产品：
96孔高吸附酶标板[NEST]
10μL/200μL/1000μL吸头[NEST]
微量离心管[NEST]
15/50ml离心管[NEST]
