尝试资料：
DMEM高糖造就基
FBS/NBS
HT选择造就基
CO2细胞造就箱
细胞计数器
单通路移液枪、多通路移液枪
相差显微镜
生物安全柜
10μL、200μL、1000μL吸头
96/24/6孔细胞造就板
15mL、50mL无菌离心管
100mm细胞造就皿
T75细胞造就瓶
96孔酶标板
尝试筹备：
阳性对照：
融合前采对应尝试的幼鼠眼球血 ，37℃搁置2h ，而后4℃搁置2h ，最后10000rpm离心10min ，取上清 ，-20℃前提下保留。（使用前提前解冻 ，稀释1000倍备用）
阴性对照：
各个阶段造就基留5ml左右 ，作为阴性对照用。
Elisa检测板筹备：
将对应抗原用CB以1μg/ml浓度参与96孔酶标板内（100μl/孔） ，4℃过夜静置包被。用1×PBST洗板2遍 ，洗濯实现 ，参与封关液封关 ，37℃封关1h ，用1×PBST洗板2遍 ，拍干水分 ，4℃短期保留 ，-20℃持久保留。
尝试流程：
融合检测：
细胞融合换液后 ，等4~7天 ，观察细胞融合状态 ，大部门细胞造就孔内出现幼细胞团 ，即可起头检测。
用排枪取融合造就上清100μL/孔至包被好的Elisa检测板中 ，由于Elisa检测板起源于表部 ，切记从细胞造就板中单次取液 ，不成反复汲取 ，取一次液换一次枪头 ，预防传染细胞造就板内细胞 ，以及交叉传染影响检测了局。（每块板预留一孔阳性对照孔 ，一孔阴性造就基对照孔）
凭据阴性对照和阳性对照的OD值 ，确定阳性孔 ，取阳性对照OD值得一半以上的数值为阳性。
第一次亚克�。�
凭据融合检测的数据 ，遴选阳性孔 ，将阳性孔中的细胞转移至24孔板中造就扩增 ，凭据细胞成长情况2~3天后选取Elisa步骤复检 ，预防假阳性。
遴选24孔板中复检阳性的孔 ，进行细胞复悬 ，使细胞在造就基中分散均匀。用细胞计数板进行计数 ，计数实现后 ，凭据计数情况比例稀释细胞悬液 ，依照1个/孔的密度均匀铺于96孔细胞造就板中 ，一个阳性克隆株铺一块细胞造就板板。[一次亚克隆选取FBS-DMEM(HT),造就基的血清使用浓度略低于融应时的浓度 ，略高于SP2/0通例造就浓度 ，可依照5% 进行分辨]
画克�。�
一次亚克隆后 ，融合细胞在CO2造就箱中造就4~5天后 ，选取相差显微镜逐孔观察 ，在单孔内有且只有一个正圆形细胞团的孔 ，即为单克隆细胞孔 ，做好象征。若无无单克隆孔 ，则遴选细胞团较少的多克隆细胞孔 ，做好象征。
一次亚克隆检测：
画克隆后 ，持续造就3~5天 ，凭据细胞成长情况 ，选取Elisa法进行一次亚克隆检测 ，优选遴选阳性单克隆孔 ，若无阳性单克隆孔 ，则遴选克隆数较少的阳性多克隆孔。遴选出来的细胞株转移至24孔扩增造就 ，进行阳性克隆株复筛 ，确保遴选的细胞株非假阳性。
二次亚克�。�
将一次亚克隆遴选出来的细胞株 ，沉复一次亚克隆步骤。细胞造就基换成FBS-DMEM ，造就基的血清使用浓度调整成SP2/0的通例造就浓度。
画克隆
二次亚克隆后4~5天 ，进行画克隆 ，单克隆孔做好象征。
二次亚克隆检测：
画克隆后 ，持续造就3~5天 ，沉复一次亚克隆检测步骤 ，遴选阳性单克隆细胞株 ，筹备进行扩增造就。
建株：
阳性单克隆细胞株需进行至少2次的亚克隆 ，检测为全阳方可建株！若为了保障不变性 ，建议进行第三次亚克隆。
挑出两次检测均为单克隆且全为阳性后 ，在24孔板中造就扩增 ，2~3天后用Elisa法进行交叉检测（重要针对带标签的蛋白抗原）和不变性鉴定。
检测合格后遴选一个细胞状态 ，长势较好且阳性OD值较高的细胞株 ，转移至6孔板进行造就扩增 ，2~3天后 ，用亚型检测试剂盒进行抗体亚型鉴定。
实现以上鉴定后 ，将单克隆细胞株转移至100m细胞造就皿或者T75细胞造就瓶中进行大量扩增。
扩增实现后将单克隆细胞株进行细胞冻存 ，象征好细胞名称、冻存者、冻存日期等信息 ，搁置冻存盒中 ，转移到-80℃冰箱 ，一天后转移至液氮罐中贮存。
冻存后一周再复苏检测 ，预防细胞株出现产抗不不变景象 ，若检测没有问题 ，则将细胞株录入细胞库中 ，并撰写尝试汇报。（细胞冻存3支/株 ，且3支确保有2个及以上冻存批次 ，预防出现冻存失误 ，细胞株迷失）
使用到的NEST产品：
10μL、200μL、1000μL吸头
96/24/6孔细胞造就板
15mL、50mL无菌离心管
100mm细胞造就皿
T75细胞造就瓶
96孔酶标板
